認識分光光度計(三)內部構造|勢動科技

發佈:2018-02-01, 週四

一部分光光度計,通常會經由以下幾個步驟,來測量樣品吸收光線的狀況與程度:

  1. 將光線分散成不同顏色的色光
  2. 擷取出某個波長的色光
  3. 將此單一色光穿透樣品
  4. 測量穿過樣品後,這個單一色光,被吸收部分能量後的強度,並量化成數值
  5. 獲得樣品對此單一色光的吸收值

若要繪製某個波長範圍的吸收光譜圖,只要將這個範圍,等分切割成若干的波長刻度,比方說,從 380nm – 390 nm,每 1nm 一個刻度,便能獲得 11個波長刻度。重複以上步驟,並將各個波長的吸收值,一一記錄下來,最後便能繪製 X軸為波長,Y軸為吸收值的光譜曲線圖。

連接每個波長的吸收值,繪製成吸收光譜圖

以下便是一部分光光度計的構造。右上角是光源,光線依序通過反射鏡、光柵、反射鏡、狹縫、然後穿過盛裝樣品的比色管之後,由光偵測器讀取光線強度的數位信號,經過信號處理過程,最後將數值或圖譜,呈現在儀器的螢幕上,或者可以將這些數據,透過 USB 傳送到電腦光譜工作站軟體,執行複雜的分析、製圖、製作報告,甚至結合其他軟體,如 Excel®、Matlab®,進行更深入的統計分析。

分光光度計的內部構造

分光單元 (光學單元)

光源

常見的光源有鎢鹵燈 (可見光)、氘燈 (紫外光)、氙燈 (可見光 + 紫外光)。可參閱「紫外可見光分光光度計的光源有哪些?」一文,了解更多有關於分光光度計光源的資訊。

https://www.acttr.com/zh/cn-faq/cn-faq-uv-vis/218-cn-faq-what-kind-of-uv-vis-lamps.html

光切換器

用來依序切換紫外光、可見光的光源,集合成完整的全波長光源。設置一個電動的反射鏡,來決定哪一道光線可以被傳送。

電動反射鏡切換左側的鎢鹵燈與右邊的氘燈

入射狹縫與反射鏡

光線先經過狹縫與反射鏡,產生如同太陽光束的平行光,照射到光柵上。

光柵

一種利用光的繞射原理所設計的光學分光元件。光柵的表面做成微小的鋸齒狀,用來將混合波長的原始光線(白光),分散成色光。早期的分光光度計,是使用三稜鏡來分光,如今三稜鏡被更精密穩定的光柵所取代。

繞射光柵乍看像一塊鏡片,細看表面呈現鋸齒狀

準直鏡、射出狹縫

分光後的色光,像扇子一樣展開,透過準直鏡旋轉角度,可以讓某個波長的色光,對準在射出狹縫上,並經過濾光片,產生純淨的單一色光。濾鏡設置的位置順序,各家廠商的設計不盡相同。

註:雖然這裡是以「純淨的單一色光」來說明,但其實光線的能量在整個波長範圍是連續的。也就是說,當通過狹縫的波長,是533nm的單一色光,這可能意味者從 532.09nm 到 533.01nm這個範圍中的色光,都通過了狹縫。

實際儀器的設計,往往不是單純一道狹縫這麼簡單,因此,有些文件,會以單光器 (monochromator) 來概括所有將原始光線,變為純淨單一波長光線的光學零組件。

樣品單元

比色管

比色管是用來盛裝液體樣品的容器,容器上方呈方形開口,以便倒入樣品。容器的材質有玻璃、石英 (紫外光),塑膠等。比色管的寬度,會影響光穿過樣品的路徑長度,造成吸收值的變化。最常見的比色管,是10mm (1公分)寬度的,也有專為如 DNA、RNA樣品所設計的微量比色管 (Micro Cuvette),或者吸光度弱的低濃度樣品所用的長光徑,10公分寬的比色管。在本文不一一介紹。

比色管座

比色管被放置在比色管座上,一般常見的是四槽的手動切換座,可以放置四隻比色管,並且在光線通過的路徑上,有簍空設計。切換座下方有拉桿,用來前後切換比色管進行量測。亦有用馬達控制,可程式控制的旋轉式比色管座。

手動式四單元比色管座,可以插入四支比色管,手動切換

光線偵測處理單元

光偵測器

目前常用的光偵測器,是矽晶光電二極體,由於每次僅偵測一道細細的光線,跟照相機不同的是,分光光度計所採用的光偵測器,畫素很少,但一般更靈敏,出來的雜訊也更少。光電二極體出來的信號是電壓,因此會再經過「類比-數位轉換器 (ADC, A/D Converter)」轉成數位信號輸出。目前一般做這些感測器的廠商,多半將兩者整合在一塊電路板上,儀器製造商不需要再格外設計。

數位信號處理器

目前多半是使用跟手機一樣的 ARM 處理器 (低階款),可同時處理信號,也可以同時身兼控制、計算的功能。從光偵測器接收到的數值,經過運算、處理,變成使用者看得懂的一連串吸收值。

顯示控制單元

液晶螢幕鍵盤

螢幕有大有小,低階的分光光度計,可從螢幕上讀出吸收值,並透過薄膜鍵盤設定參數、切換功能。中高階的分光光度計,可在螢幕上顯示光譜圖,直接從單機上完成大部分的工作。甚至有些大螢幕的分光光度計,能夠直接在上面觸控操作。

USB連線

一些分光光度計,設計有 USB 插座,讓使用者能將光譜儀連線到電腦,或者插上 USB行動碟,輸出資料。連線到電腦的分光光度計,能夠透過軟體來操控儀器,並且將儀器的測量結果,進行初步的分析,比方可以找出光譜圖上的波峰波谷。顯示在電腦螢幕上,並且可透過印表機,製作精美的報告、圖表,或者與其它的軟體共用,進行光譜解析。

其他分光光度計設計細節

除了以上的基本結構外,一部分光光度計還有更多的細節設計,讓測量趨於完美,無論是對於光線路徑的安排,旋轉移動光學裝置的步進馬達、鏡片、濾光片的選用,都會影響最後測量的精確度、穩定度。此外,一些測量必要的測量步驟與技術,如,系統基線測量、空白吸收值測量、檢量線製作,單一波長量測、光譜掃描、時間動態量測...等,對於特定的應用,也是非常重要。

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